domingo, 15 de junio de 2014

Informe

Química Practico: (ensayo de reconocimiento de proteínas):


Proteínas:

Las proteínas son macromoléculas compuestas en su mayoría por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, entre otros. Las mismas están formadas por la unión de aminoácidos, unidos mediante enlaces peptídicos. La disposición y orden de los aminoñacidos en una proteína dependerá del código genético (ADN).
 Las proteínas ocupan un lugar de máxima importancia entre las moléculas constituyentes de los seres vivos (biomoléculas).  Prácticamente no existe proceso biológico alguno que no dependa de la participación de las proteínas.
Las proteínas o prótidos  están presentes en todas las células vivas y alrededor de un 50% del peso seco del cuerpo humano se compone de proteínas. Las proteínas son los componentes estructurales principales de los tejidos animales, son parte fundamental de la piel, uñas, cartílagos y músculos. Otras proteínas catalizan reacciones, transportan oxígeno, sirven como hormonas para regular procesos corporales específicos y llevan a cabo otras tareas.

Informe de la actividad experimental

Objetivo:
El objetivo de esta práctica es reconocer la naturaleza proteica de algunas sustancias tales como: caseína, ovoalbúmina, gelatina, aspartamo, glicina y suero. Para ello utilizaremos los ensayos de Biuret y Xantoproteica.

Materiales:                                                                  



·         Vaso de bohemia

 

      
·         Varilla de vidrio


·         Mechero 

















·         Soporte 










·         Tela metálica 


















·         Gradilla


















·         Tubos de ensayo 















·         Papel de filtro




·         Termómetro














Reactivos utilizados:

 - Hidróxido de sodio al 10% (NaOH)(Biuret)
 - Sulfato cúprico al 1%  (CuSO)(Biuret)
 - Ácido nítrico concentrado
 - (HNO)(xantoproteica)
 - Ácido etanoico 2,0M 
 - Agua
 - Leche descremada en polvo
 - Clara de huevo
 - Gelatina
 - Glicina
 - Aspartamo



Fundamento de los ensayos de caracterización:

Los ensayos de Biuret y Xantoproteico permiten determinar el carácter proteico de las sustancias a estudiar. Sin embargo, las vías para ello utilizadas por cada uno difieren.

Biuret

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínaspéptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida
El biuret es un grupo químico con fórmula R2NC(O)NHC(O)NHR2.
La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (un dímero de urea), por ejemplo (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla con la cual esta reacción da positiva. 
Mediante la reacción del Biuret podemos determinar la presencia de proteínas en una muestra.
El reactivo de Biuret contiene sulfato cúprico (CuSO4) en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH).  Para nuestra actividad experimental utilizamos NaOH al 10 %, y lo suministramos mediante un cuenta gotas. El ensayo de Biuret lo haremos añadiendo a la muestra que se encuentra en los tubos de ensayo veinte gotas de hidróxido de sodio (NaOH) al 10% y dos gotas de sulfato cúprico (CuSO4) al 1%.



La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.
La formación del biuret la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos.
Cuando una proteína se pone en contacto con una base concentrada, se forma la sustancia compleja denominada Biuret



Al agregar el reactivo de sulfato de cobre (CuSO4) más la solución de proteína precipita, y puede ocurrir que:

POSITIVO:

Detectamos un postitivo con el reactivo de Biuret cuando el mismo se torna a una coloración violeta. Ya que el resultado de dicha prueba fue positivo concluimos que en dicha muestra encontramos enlaces peptídicos, característicos de las proteínas. Con esta reacción se obtiene un resultado positivo  en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas. No identifica si una muestra tiene solo aminoácidos porque para que se dé la reacción debe haber dos o más uniones peptídicas. Al esta ser una reacción cuantitativa la intensidad del color violeta indica una mayor presencia de enlaces peptídicos en la muestra. 


Ejemplo de positivo



Nota: También puede ocurrir que se torne en una coloración rosa cuando se combina con poli péptidos de cadena corta 

NEGATIVO:

Si la coloración final no es violácea, el resultado es negativo lo que significa que no hay por lo menos dos enlaces peptídicos en la muestra.
Al no ser un reactivo que reaccione solamente con proteínas, se debe tomar extremo cuidado a la hora de obtener los resultados. Los mismos deben ser evaluados cuidadosamente, para asegurarnos que no sean erróneos

Ejemplo de negativo(Izq) junto a su testigo(Der)


Ensayo Xantoprotéica

El ensayo Xantoproteico detecta la presencia de proteínas solubles, empleando ácido nítrico. Esta prueba es más específica que el Biuret dado que caracteriza a los aminoacidos aromáticos. La reacción ocurre cuando se produce la nitración del anillo aromático presente en los aminoacidos (tirosina, triptófano, fenilalanina) por la obtención de nitrocompuestos de color amarillo.En las condiciones del experimento, solo la tirosina y el triptófano daran positivo, esto es porque su anillo bencenico contiene un OH que lo hace más suceptible al ataque electrofílico. 
Este ensayo consiste en agregar alrededor de 10 gotas de HNO3 concentrado a una sustancia.

POSITIVO

Esta sustancia, al cabo de unos minutos, puede tornarse amarilla(lo que implica que dio positivo).Da positivo cuando la sustancia que está siendo analizada posee aminoácidos con grupos aromáticos, principalmente el grupo fenólico de la  tirosina.



Ejemplo de positivo


NEGATIVO
Si esta sustancia al cabo de unos minutos no altera su coloración podemos concluir que el resultado del ensayo xantoproteico es negativo por lo cual no se ha detectado una sustancia que posea restos aromáticos.
A diferencia de la reacción de Biuret, el ensayo xantoproteico es cualitativo, no cuantitativo.

Ejemplo de negativo


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